四种叶绿素测定方法简析

叶绿素含量是植物生长环节中的重要生理指标。由于它对周围环境非常敏感，与植物的光合作用和养分吸收密切相关，因此被广泛用作植物生长的常规测量指标项目。叶绿素含量的测定方法有很多，国际上普遍采用传统的Arnon法（又称研磨法）。但这种方法需要将植物材料研磨后进行转移、过滤或离心处理，不仅工作量大，而且不可避免地使检测人员长时间接触空气中挥发的试剂，对人体危害较大。近年来，直接浸取法受到重视，用不同比例的混合液提取叶绿素，证明了混合液提取的可行性，对传统的Arnon法进行了改进，将样品冷冻处理后，用50℃丙酮静置萃取计量，大大提高了工作效率。

(1)研磨法：称取0.5g试样于研钵中，加入少量CaCO3和5mL 80%丙酮，充分研磨至白色（约5min），转移至10mL带塞离心管中，定容至刻度，摇匀后置于4℃冰箱中12 h，离心10 min（2000 r/min），取上清液测定。

(2)直接浸取法：称取试样0.5g于10mL带塞离心管中，用80%丙酮定容至刻度，于暗柜中静置72h浸取，取上清液测定。

(3)样品冷冻后50℃提取液提炼法：称取0.5g样品于10mL带塞离心管中，放入冰箱冷冻2小时，取出后加入10mL在水浴锅中加热至50℃的80%丙酮。充分摇匀后，在暗柜中静置4h，取上清液测定。

(4) 叶绿素检测仪：叶绿素检测仪是所有方法中zui快的。您只需手持叶绿素检测仪，将叶片插入仪器的感应部位，然后关闭测量探头即可。用于此测量的仪器也称为便携式叶绿素检测仪，因为叶绿素检测仪机身小巧，可以轻松携带到野外进行测量。

在上述测定方法中，直接浸取法提取效果zui好，但耗时较长，传统研磨法叶绿素的损失较大，冷冻后用50℃提取液提炼法操作简便且提炼速度较快，在提炼率和稳定性方面均显示良好的优越性。冷冻后用50℃提取液提炼法的比较好的试验条件为将试验材料冷冻1h后，静置提炼3h。与其他三种化学方法相比，叶绿素检测仪更快、更方便。而且，用叶绿素检测仪测量叶绿素含量时，不会对叶片造成伤害，这也是使用叶绿素检测仪的另一大优势。因为不需要摘叶，可以直接用仪器夹住叶子进行测量，这样就可以在作物生长的全过程中对具体的叶子进行监测，进而获得更科学的分析结果。