水中叶绿素a的测定方法

叶绿素是植物光合作用中的重要光合色素，通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产力情况。浮游藻类里常见的叶绿素有a、b、c、d四种类型，其中，叶绿素a在一切浮游藻类里大约占有机物干质量的1%~2%，是环境监测中表征浮游植物生物量最常用的指标之一，所以常被用于研究地表水环境的富营养化。那水中叶绿素a含量一般是多少呢？水体富营养化一般采用的指标是：氮含量超过0.0.3 mg/L，磷含量大于0.01～0.02mg/L，BOD大于10mg/L，pH值7～9的淡水中细菌总数超过10万个／毫升，叶绿素a含量大于10ug/L。

水质叶绿素a的测定方法有分光光度法、荧光光谱法、色谱法和遥感监测等方法，其中，分光光度法和荧光光谱法应用最为广泛。下面小编来具体介绍一下。

1、分光光度法

分光光度法属于光度法的一种，该分析方法采用的原理是物质分子对光具有选择吸收的特性。叶绿素a的最大吸收峰位于663nm，在一定浓度范围内，其吸光度与浓度符合朗伯-比尔定律，可根据吸光度-浓度之间的线性关系，计算叶绿素a的浓度。

2、荧光光谱法

叶绿素分子被紫外光照射后可发射出特征红色荧光，其荧光强度与叶绿素浓度呈正比，据此可釆用荧光法进行叶绿素a的定量分析。普通萃取荧光法的操作步骤主要为标准溶液的配制、标准曲线的制定和样品荧光强度的测定。将提取的新鲜绿色植物液中的叶绿素作为储备液，用分光光度法标定其浓度：将标准储备液稀释配制成标准系列，用荧光光度计测定标准系列的荧光强度，绘制叶绿素a标准曲线；由样品测得的荧光强度从叶绿素a标准曲线上查得相应浓度。

3、色谱法

高效液相色谱(HPLC)法是一种广泛应用于化学、医药、生命科学等领域的分析手段。使用高效液相色谱法测定叶绿素a时，需要破坏测定藻类的原样，前处理方法与分光光度法的前处理方法相似。

4、遥感监测

水质遥感监测是通过监测一定波长范围内的水体辐射值，定量分析水体反射光谱特征与水质指标间的关系，进而构建水质指标反演算法的一类方法体系。遥感技术测定叶绿素a近年来已经被国内外许多学者证实具有监测范围广、速度快、成本低和便于进行长期动态监测的优势。